瓊脂糖電泳槽使用全攻略：從制膠到跑膠的關(guān)鍵技巧與常見(jiàn)問(wèn)題解析

　　以下是天津本生技術(shù)小編對(duì)瓊脂糖電泳槽從制膠到跑膠的全流程操作指南及問(wèn)題解決方案：

　　一、?制膠關(guān)鍵技巧?

　　凝膠濃度選擇?

　　0.7%-1%膠適用于1-20kb大片段DNA，2%膠用于50-1000bp小片段;

　　RNA分析建議使用變性瓊脂糖凝膠(如含甲醛)。

　　緩沖液配置?

　　TAE緩沖液適合快速電泳(大片段分離)，TBE緩沖液分辨率更高(小片段分離);

　　緩沖液需現(xiàn)配現(xiàn)用，重復(fù)使用會(huì)導(dǎo)致pH上升、條帶模糊。

　　制膠操作?

　　微波加熱瓊脂糖至透明(避免局部沸騰)，冷卻至60℃再加核酸染料(如GelRed);

　　倒膠時(shí)緩慢傾斜模具，避免氣泡產(chǎn)生，梳子垂直插入距底板1mm處。

　　二、?電泳運(yùn)行優(yōu)化?

　　上樣規(guī)范?

　　DNA與Loading Buffer按4:1混合，上樣量≤孔容積80%(避免溢出);

　　Marker需預(yù)沉降5分鐘再通電，防止條帶歪斜。

　　電泳參數(shù)?

　　電壓設(shè)置：5-10V/cm(膠長(zhǎng)度)，>20V/cm易致條帶擴(kuò)散;

　　溫度控制：常規(guī)DNA電泳<30℃，長(zhǎng)片段(>10kb)建議<15℃。

　　緩沖液管理?

　　液面需覆蓋凝膠1-2mm，過(guò)低會(huì)導(dǎo)致條帶扭曲;

　　鉑金電極需定期用蒸餾水清洗，防止鹽結(jié)晶腐蝕。

　　三、?常見(jiàn)問(wèn)題解析?

　　問(wèn)題現(xiàn)象? ?原因分析? ?解決方案?

　　條帶模糊/拖尾 DNA降解、緩沖液陳舊或上樣過(guò)量 更換緩沖液，減少上樣量，避免核酸酶污染

　　帶扭曲 電場(chǎng)不均或梳子拔出不規(guī)范 預(yù)電泳5分鐘(低電壓)，垂直緩慢拔梳子

　　無(wú)條帶顯示 電極接觸不良或DNA未染色 檢查電極連接，確認(rèn)染料活性

　　背景熒光雜斑 制膠雜質(zhì)或紫外照射過(guò)久 過(guò)濾瓊脂糖溶液，縮短紫外觀(guān)察時(shí)間

　　四、?設(shè)備維護(hù)建議?

　　每次使用后需用蒸餾水沖洗槽體及電極，避免緩沖液殘留腐蝕;

　　長(zhǎng)期存放時(shí)拆卸梳子與模具，防止塑料變形。

　　通過(guò)規(guī)范操作與針對(duì)性?xún)?yōu)化，可顯著提升電泳結(jié)果的可重復(fù)性。

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　　注：以上資料僅供參考，具體請(qǐng)咨詢(xún)技術(shù)老師。

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