ELISA實(shí)驗(yàn)過程中出現(xiàn)溢值的原因分析

以下是天津本生對(duì)ELISA實(shí)驗(yàn)中出現(xiàn)溢值(OD值超出檢測(cè)范圍)的常見原因及解決方案：

一、樣本與標(biāo)準(zhǔn)品問題

稀釋錯(cuò)誤‌

樣本或標(biāo)準(zhǔn)品未按說(shuō)明書要求稀釋，濃度過高導(dǎo)致信號(hào)過強(qiáng)。

解決‌：嚴(yán)格遵循稀釋比例，使用試劑盒配套稀釋液。

樣本污染‌

樣本混入雜質(zhì)(如溶血、細(xì)菌污染)或交叉污染，引發(fā)非特異性反應(yīng)。

解決‌：離心處理樣本，避免重復(fù)使用吸頭，操作時(shí)分區(qū)處理樣本。

　　二、實(shí)驗(yàn)操作因素

孵育條件不當(dāng)‌

溫度過高或時(shí)間過長(zhǎng)，加速抗原抗體結(jié)合及底物顯色。

解決‌：校準(zhǔn)孵育箱溫度，使用計(jì)時(shí)器控制時(shí)間。

未覆蓋酶標(biāo)板‌

孵育時(shí)未蓋板導(dǎo)致液體蒸發(fā)，局部濃度升高。

解決‌：每次孵育均使用配套封板膜。

顯色時(shí)間過長(zhǎng)‌

TMB底物顯色超過說(shuō)明書建議時(shí)間，OD值異常升高。

解決‌：顯色后密切觀察，及時(shí)終止反應(yīng)。

三、試劑與設(shè)備問題

偶聯(lián)試劑濃度過高‌

HRP標(biāo)記抗體或鏈霉親和素未正確稀釋，信號(hào)放大過度。

解決‌：按說(shuō)明書現(xiàn)配現(xiàn)用，避免濃縮液直接使用。

檢測(cè)波長(zhǎng)錯(cuò)誤‌

酶標(biāo)儀波長(zhǎng)設(shè)置與底物要求不匹配(如TMB應(yīng)為450nm)。

解決‌：校準(zhǔn)儀器，核對(duì)說(shuō)明書波長(zhǎng)參數(shù)。

洗滌不充分‌

未結(jié)合的試劑殘留導(dǎo)致背景升高，間接引發(fā)溢值。

解決‌：增加洗滌次數(shù)(3-5次)，拍干孔內(nèi)液體。

四、其他注意事項(xiàng)

避免使用錯(cuò)誤稀釋液‌：僅使用試劑盒內(nèi)配套稀釋液。

分裝試劑‌：避免反復(fù)凍融導(dǎo)致活性異常。

質(zhì)控對(duì)照‌：設(shè)置陰陽(yáng)性對(duì)照，監(jiān)控實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)穩(wěn)定性。

通過排查上述環(huán)節(jié)并規(guī)范操作，可有效減少溢值現(xiàn)象。

注：以上資料僅供參考，不作為實(shí)驗(yàn)依據(jù)，具體請(qǐng)咨詢技術(shù)老師或產(chǎn)品品牌供應(yīng)商。

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