以下是本生ELISA實(shí)驗(yàn)中不同類(lèi)型樣本處理方法的詳細(xì)總結(jié)，按樣本類(lèi)型分類(lèi)說(shuō)明：

　　一、血清樣本處理

　　采集與靜置?

　　使用無(wú)熱原、無(wú)內(nèi)毒素試管采集血液，室溫靜置1-2小時(shí)或4℃過(guò)夜使血液凝固。

　　傾斜試管可擴(kuò)大液面橫截面，促進(jìn)血清分離。

　　離心與保存?

　　4℃條件下以1000×g離心15-20分鐘，收集上清。

　　分裝后于-20℃或-80℃保存，避免反復(fù)凍融。

　　注意事項(xiàng)?

　　避免溶血(紅細(xì)胞破裂釋放過(guò)氧化物酶會(huì)導(dǎo)致假陽(yáng)性)。

　　避免細(xì)菌污染(內(nèi)源性HRP干擾結(jié)果)。

　　二、血漿樣本處理

　　抗凝劑選擇?

　　常用EDTA(2%)、肝素(1%)或檸檬酸鈉(3.8%)。

　　抗凝劑與血液比例需嚴(yán)格按說(shuō)明書(shū)要求(如檸檬酸鈉1:9)。

　　離心與保存?

　　采集后30分鐘內(nèi)4℃離心(1000×g，15分鐘)。

　　上清分裝凍存(-20℃或-80℃)，避免高血脂或溶血樣本。

　　三、細(xì)胞培養(yǎng)上清處理

　　離心去除雜質(zhì)?

　　直接收集上清，4℃條件下以1000×g離心20分鐘去除細(xì)胞碎片。

　　建議二次離心以提高純度。

　　保存條件?

　　分裝后-80℃凍存，避免反復(fù)凍融。

　　四、組織勻漿處理

　　前處理?

　　用預(yù)冷PBS(0.01M，pH7.4)沖洗組織，去除血液殘留。

　　稱(chēng)重后剪碎，按1:9(重量體積比)加入PBS或裂解液。

　　勻漿與離心?

　　冰浴條件下機(jī)械勻漿或超聲破碎。

　　4℃條件下以5000-10000×g離心5-10分鐘，收集上清。

　　蛋白濃度測(cè)定?

　　使用BCA法測(cè)定總蛋白濃度，調(diào)整至統(tǒng)一水平后檢測(cè)。

　　五、其他樣本處理

　　尿液?

　　2-8℃下以1000×g離心15分鐘去除雜質(zhì)。

　　糞便?

　　PBS重懸后冰上振蕩15分鐘，5000×g離心5分鐘取上清。

　　腦脊液/胸腹水?

　　直接離心(4000-5000×g，10分鐘)后取上清。

　　六、通用注意事項(xiàng)

　　避免反復(fù)凍融?：所有樣本分裝保存，凍融不超過(guò)3次。

　　檢測(cè)時(shí)效?：-20℃保存樣本需在1-6個(gè)月內(nèi)檢測(cè)，4℃保存樣本需1周內(nèi)完成。

　　污染控制?：操作全程避免細(xì)菌污染及外源性酶干擾(如NaN3抑制HRP活性)。

　　以上方法需結(jié)合具體試劑盒說(shuō)明書(shū)調(diào)整。

　　注：以上資料僅供參考，完整操作請(qǐng)以實(shí)說(shuō)明為準(zhǔn)，不同品牌可能存在細(xì)節(jié)差異?。

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