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有哪些常用的ELISA板包被方法?

更新時間:2025-11-04    點擊次數(shù):396

    有哪些常用的ELISA板包被方法?

    ELISA板包被方法主要分為物理吸附和化學偶聯(lián)兩大類,具體選擇取決于目標分子(抗原/抗體)的特性‌。

    物理吸附(被動包被)

    原理‌:利用聚苯乙烯微孔板的疏水性,通過疏水相互作用和靜電吸附將蛋白質固定在孔板表面‌。

    適用對象‌:大多數(shù)蛋白質(如抗體、重組抗原、病毒蛋白等)‌。

    不適用對象‌:小分子(如半抗原、短肽<10個氨基酸),因其吸附能力弱‌。

    化學偶聯(lián)(主動包被)

    原理‌:通過化學交聯(lián)劑(如EDC/NHS)將蛋白質的氨基(-NH?)或羧基(-COOH)與微孔板表面的活性基團共價結合‌。

    適用對象‌:小分子抗原(如藥物、激素、短肽)、多糖、脂類等不易吸附的分子‌。

    包被方法的選擇依據(jù)

    直接包被‌:將抗原或抗體直接通過物理吸附或化學連接固定在固相載體表面,操作簡單但可能因分子構象變化影響活性。

    間接包被‌:如親和素-生物素化抗體模式,先包被鏈霉親和素,再通過生物素-親和素高親和力間接固定目標分子,穩(wěn)定性更好但步驟復雜。

    關鍵影響因素

    包被條件‌:緩沖液pH(常用pH9.6的碳酸鹽緩沖液)、溫度、時間及蛋白質濃度需優(yōu)化‌。

    載體特性‌:聚苯乙烯微孔板的吸附性能、空白值及孔間均一性直接影響包被效果。

    注:以上僅供參考,不作為實際數(shù)據(jù),實驗需嚴格遵循說明或咨詢技術老師。Elisa試劑盒

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